- Колоночная
- В тонких слоях
Колоночная хроматография
Конструкционные и эксплуатационные характеристики колонки
- Поперечное сечение
- Форма
- Аналитические:
- спиралевидные (должен быть достаточно большой диаметр, чтобы нивелировать разницу между внутренним и внешним диаметром)
- V-образные
- Препаративные: прямые
- Длина
- Материал
- стекло
- полимерное стекло
- металл (нержавеющая сталь, латунь и др)
- Рабочее давление в колонке
- Техника эксперимента
Способы заполнения колонки
- мокрый (суспензионный) – в стакане взмучивается сорбент с растворителем, затем суспензию при перемешивании заливают в колонку.
- сухой – колонка заполняется сухим сорбентом, под давлением снизу подается растворитель.
Для вытеснения пузырьков газа и равномерного заполнения колонки сорбентом необходимо постукивать резиновой трубкой о стенки колонки.
Скорость подачи подвижной фазы
- линейная скорость потока (см/мин)
- объемная скорость потока (мл/мин)
Ввод пробы
- мокрый – хроматографируемое вещество в виде раствора заливается в колонку.
- сухой – к раствору хроматографируемого вещества добавляют сорбент, растворитель упаривают и пропитанный веществом высушенный сорбент засыпают в колонку.
Второй способ нанесения предпочтителен, так как при таком способе нанесения фронт вещества при хроматографировании более равномерный и «расплывается» в меньшей степени.
Соотношение между длиной колонки и внутренним диаметром
Как правило, соотношение длина-поперечное сечение = 15:1.
Чем больше длина колонки, тем эффективнее разделение и дольше процесс хроматографирования.
Чем больше поперечное сечение, тем большее количество вещества можно хроматографировать (препаративно), но происходит размывание зон.
Внутренняя поверхность колонки
Внутренняя поверхность колонки должна быть шероховатой, для избежания«пристеночного» эффекта – если колонка изнутри гладкая, то по стенкам растворитель будет стекать быстрее, чем по сорбенту.
Детектирование
- он-лайн (в режиме реального времени)
- офф-лайн (автоматизированое детектирование,не требующее участия хроматографиста),
Методы детектирования:
- Рефрактометрия
- УФ-спектроскопический детектор
- ИК-детектор
- «Транспортные» детекторы
Качественный и количественный анализ фракций
Выход 80% считается хорошим результатом.