Хроматография. Лекция 3. Колоночная хроматография

  • Колоночная
  • В тонких слоях

Колоночная хроматография

Конструкционные и эксплуатационные характеристики колонки

  • Поперечное сечение
  • Форма
    • Аналитические:
      • спиралевидные (должен быть достаточно большой диаметр, чтобы нивелировать разницу между внутренним и внешним диаметром)
      • V-образные
    • Препаративные: прямые
  • Длина
  • Материал
    • стекло
    • полимерное стекло
    • металл (нержавеющая сталь, латунь и др)
  • Рабочее давление в колонке
  • Техника эксперимента

Способы заполнения колонки

  1. мокрый (суспензионный) – в стакане взмучивается сорбент с растворителем, затем суспензию при перемешивании заливают в колонку.
  2. сухой – колонка заполняется сухим сорбентом, под давлением снизу подается растворитель.

Для вытеснения пузырьков газа и равномерного заполнения колонки сорбентом необходимо постукивать резиновой трубкой о стенки колонки.

Скорость подачи подвижной фазы

  1. линейная скорость потока (см/мин)
  2. объемная скорость потока (мл/мин)

Ввод пробы

  1. мокрый – хроматографируемое вещество в виде раствора заливается в колонку.
  2. сухой – к раствору хроматографируемого вещества добавляют сорбент, растворитель упаривают и пропитанный веществом высушенный сорбент засыпают в колонку.

Второй способ нанесения предпочтителен, так как при таком способе нанесения фронт вещества при хроматографировании более равномерный и «расплывается» в меньшей степени.

Соотношение между длиной колонки и внутренним диаметром

Как правило, соотношение длина-поперечное сечение = 15:1.
Чем больше длина колонки, тем эффективнее разделение и дольше процесс хроматографирования.
Чем больше поперечное сечение, тем большее количество вещества можно хроматографировать (препаративно), но происходит размывание зон.

Внутренняя поверхность колонки

Внутренняя поверхность колонки должна быть шероховатой, для избежания«пристеночного» эффекта – если колонка изнутри гладкая, то по стенкам растворитель будет стекать быстрее, чем по сорбенту.

Детектирование

  • он-лайн (в режиме реального времени)
  • офф-лайн (автоматизированое детектирование,не требующее участия хроматографиста),

Методы детектирования:

  • Рефрактометрия
  • УФ-спектроскопический детектор
  • ИК-детектор
  • «Транспортные» детекторы

Качественный и количественный анализ фракций

хроматография

хроматография

хроматография

Выход 80% считается хорошим результатом.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *